人们对破译血液免疫细胞每个亚群的复杂作用越来越感兴趣，以评估它们如何塑造免疫反应、影响癌症和疾病进展以及影响药物有效性。为了克服这一困难，迫切需要在单细胞水平和亚群水平对免疫系统进行高通量和深入分析的方法和仪器。

为满足市场和客户需求，Agilent潜心研究，终于在今年5月份重磅发布了NovoCyte Opteon光谱流式细胞仪。

为了验证NovoCyte Opteon的实力，我们使用此仪器开发了45色光谱流式免疫表型分析配色方案以飨读者。

01方案简介

该配色方案扩展了之前发表的40个标志物的配色方案OMIP-069。除OMIP-069中的40个标记物，我们还纳入了5种其他标志物：CD45RO、CD33、CD233(LAG-3)、CD69和CD31。整个抗体和荧光染料配色方案如下表所示。该方案的复杂指数为55.38，仅比已发布的40色OMIP-069方案高1.66，且该方案在客户端现场重现，赢得了客户的高度好评。

02结果展示

该方案定量了健康PBMCs中主要固有免疫细胞类型和适应性免疫细胞类型上表达的外周免疫亚群占比、蛋白表达、活化标志物、耗竭标志物和分化标志物。使用各个群体表达的共有表面标志物确定群体占比，并使用与细胞活化和增殖(CD69、HLA-DR、CD38)、细胞耗竭和衰老(PD-1、CD223、CD57)、细胞分化(CCR7、CD27、CD28、CD45RA、CD45RO、CD127)和细胞趋化或迁移潜能(CXCR3、CCR6、CCR5、CXCR5)相关的标志物进一步评估各个群体的表征。设门策略见下图。

免疫学研究需要一个大型、复杂的抗体组合来全面研究不同类型的免疫细胞，以及它们的功能状态，如活化、耗竭、分化和成熟。在某些情况下，原代细胞样品可能表现出高自发荧光，与传统的非光谱流式相比，光谱流式细胞仪

Opteon 可以为低表达生物标志物提供更好的分辨率和灵敏度。

对于细胞疗法开发，需要相对多的生物标志物组合，无论是用于患者(自体疗法)或供体(同种异体疗法)免疫细胞表征，还是用于细胞疗法分析开发(开发和验证用于监测和鉴定细胞疗法的生产过程)，光谱流式都具有相对容易的独特优势，并且能够将一种或多种生物标志物添加到已经开发的panel中，以满足对个体患者进行检测的需求。

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责任编辑：kj005